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Material und Methoden

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modernen Sequenzierern, da diese die Bande mit Hilfe eines fixen

Rotlichtlasers beim Vorbeilaufen detektieren (Abbildung 2.6). Der Computer

erstellt im Folgenden eine graphische Darstellung der Basensequenz.

2.7.2 Material

2.7.2.1 Geräte

•

Sequencer ALF®express (Fa. Pharmacia Biotech, Uppsala/Schweden)

Elektrophorese-Set: Heizplatte (standard), Glasplatte (standard), Spacer (0,5 mm),

Kamm (0,5 mm)

•

Software AM V3.0 (Fa. Pharmacia Biotech, Uppsala/Schweden)

Software ALFwin v1.10 (Fa. Pharmacia Biotech, Uppsala/Schweden)

•

MicroSpin™ S-300 HR Columns Kat. Nr. 27-5130-01 (Fa. Pharmacia Biotech,

Uppsala/Schweden)

•

Sterilfilter Kat. Nr. 16534 (Fa. Sartorius, Göttingen)

2.7.2.2 Chemikalien

•

Amoniumpersulfat (APS) Kat. Nr. A-3678 (Fa. Sigma, Deisenhofen)

•

SequaGel-6™ Kat. Nr. 900610 (Fa. Biozym, Hess. Oldendorf)

6% (w/v) Acrylamid/Bisacrylamid 19:1

0,1 M Tris-Borat

2 mM ETDA, pH 8,3

8,3 M Harnstoff

TEMED

•

Thermo Sequenase fluorescent labelled primer sequencing kit with 7-deaza-dGTP

Kat. Nr. RPN 2538 (Amersham Life Science, Braunschweig) beinhaltet

Reagenz A ddATP, Tris-HCl pH 9,5,

Magnesiumchlorid, Tween™ 20,

Nonidet™ P-40, 2-Mekaptoethanol,

dATP, dCTP, dTTP, 7-deaza-dGTP,

thermostabile Pyrophosphatase,

Thermo Sequenase DNA Polymerase

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